Просмотры:0
Есть 5 шагов для подготовки образцов: 1. Фиксация Фиксация выполняется сразу после удаления образца, который будет наблюдаться. Он используется для иммобилизации и постоянного сохранения образца как можно более жизненно важное состояние. Его можно выполнить с помощью фиксативного решения или замораживания: - Фиксация в фиксативном растворе осуществляется путем погружения биологического материала в раствор формалина. -Фиксация путем замораживания состоит в том, чтобы погрузить образец в замораживающую ткани (в жидком состоянии при температуре окружающей среды и в твердом состоянии при -20 ° C), которая затем охлаждается в жидком азоте. Замороженный образец сохраняется до секции. Этот шаг выполняется в форме в соответствии с ориентацией, выбранной для последующего секции. 2. Встроение Встраивается шаг, который следует за фиксацией в фиктивном решении. Он состоит в упрочнении образца в парафиновой среде, чтобы иметь возможность выполнять секцию. Необходимо заранее обезвоживать образец путем замены молекул воды в образце этанолом. Поскольку этанол и парафин не являются недоступными, сначала используется промежуточный \"очищающий \" агент, который недоступен с парафином. После стадии очистки образцы погружаются в парафиновые ванны. Эти шаги выполняются с использованием автомата дегидратации. Следующий шаг встраивания выполняется с помощью центра встраивания. Образец помещается в форму, заполненную расплавленным парафином и тщательно ориентирован в соответствии с ее плоскостью секции. Полученный блок затем охлаждается. Затем образец разделен с использованием микротома. 3. Разрешение выполняется с использованием микротомии или криотомии. Раздел является важным шагом для приготовления слайдов, поскольку оно обеспечивает надлежащее наблюдение образца с помощью микроскопии. -Образцы, встроенные в парафин, разрезают поперечным сечением, используя микротом, в тонкие срезы из 5 микрометров. Стеклянные предметные стекла покрыты раствором, который содержит добавку, чтобы держать раздел прикрепленным к слайду. Затем слайды помещают на горячую пластину, чтобы обеспечить равномерное распространение образца. Как только слайды нагреваются, остаточная жидкость удаляется вручную. Затем слайды сушат при комнатной температуре. - Замороженные образцы вырезаны с помощью криостата. Замороженные секции затем помещают на стеклянную слайд для хранения при -80 ° C. Биоальтернативы оценивают подходящие условия фиксации и разделения в соответствии с вашей выборкой и по вашему исследованию. Выбор этих условий подготовки имеет решающее значение для минимизации артефактов. Парафиновое встрадание предпочитается для сохранения тканей; Замораживание более подходит для сохранения ДНК и РНК, а также для маркировки водорастворимых элементов или тех, кто чувствителен к фиксационной среде. 5. Монтаж Срезы монтируются между слайдами и покровными стеклами, используя продукт для обеспечения адгезии. Слайды готовы к хранению или наблюдению. Для наблюдений флуоресцентной микроскопии используется монтажная среда, чтобы временно уменьшить потерю флуоресценции. 4. Окрашивание и иммунолеолека - Окрашивание увеличивает контрасты, чтобы распознать и дифференцировать различные компоненты биологического материала. Образец сначала депрафинизируется и регидратируется, так что полярные красители могут пропитать ткани. Таким образом, различные красители могут взаимодействовать с компонентами, чтобы окрашиваться в соответствии с их сродством. После того, как окрашивание завершено, слайд промывается и обезвоживается для шага монтажа. - Иммунолубирование обнаруживает конкретные компоненты клеток и ткани (антигены) с использованием поликлональных или моноклональных антител. Раствор, который содержит антитело, осаждается на образец, который затем промывается для удаления несвязанных антител.
